实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，从而对实验起始模板定量及定性分析。实时荧光定量PCR的化学原理包括染料法和探针法，原理说明如下：

1、荧光染料法：SYBR Green I 是一种与双链DNA小沟结合的荧光染料，SYBR Green I只与双链DNA结合才能发出荧光，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，荧光信号与双链DNA分子数成正比，随着扩增产物增加而增加，荧光信号的强度代表了反应体系中双链DNA分子的数量。

2、TaqMan探针法：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累，因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

3、TaqMan-MGB探针法：TaqMan-MGB探针，即在原来TaqMan 探针的基础上多了一个MGB小沟结合物，MGB探针包括一个不发荧光的淬灭基团（NFQ），极大的******了传统淬灭基团产生的背景荧光，提高信噪比，另外MGB（小沟结合物）增加了Tm值，使探针设计长度缩短至约15bp，提高了探针设计的灵活性。

1. 快速热循环模式：5-30微升反应体积， 30分钟内完成实验，效果与标准2 小时模式完全一致；

2. 加热冷却速度： 95-55℃温度范围内样品基座的平均升降温3.5℃/秒，******升降温速度5.5℃/秒；

3. 可同时检测5种荧光染料，五色荧光滤光片能够有效地分辨包括：

    FAM™/SYBR® Green I、VIC®/JOE、NED™/TAMRA™/ Cy3®、ROX™/Texas Red®和Cy5®在内的多种荧光染料；

4. 配备完备的定量PCR软件，等位基因分析软件，探针及引物设计软件。

    可用于PCR引物，巢式PCR，多重PCR引物，RT-PCR引物和Taqman探针的设计和自动测试。

1、******定量（Absolute Quantification）
2、相对定量（Relative Quantification）
3、等位基因分型（Allelic Discrimination）
4、阴阳性鉴定（Plus/Minus with IPC）